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發(fā)布時間:2024-05-21
關鍵詞:谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶檢測
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來源:北京中科光析科學技術研究所
因業(yè)務調(diào)整,部分個人測試暫不接受委托,望見諒。
谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的檢測方法需要依據(jù)具體的應用場景和所需的檢測精度來選擇,同時還需參照相關的國家標準,如GB 25535-20105。在檢測過程中,可能還會使用到如高效液相色譜儀(HPLC)、氣相色譜儀(GC)、紫外-可見光譜儀等實驗室儀器。
谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶是一種在多種生物體中廣泛存在的酶,它能夠催化蛋白質(zhì)多肽鏈之間或之內(nèi)的?;D(zhuǎn)移反應,從而促進蛋白質(zhì)或肽之間的共價交聯(lián)129126。這種酶在食品工業(yè)中尤為重要,因為它可以改善食品的質(zhì)構(gòu)、提高蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值、形成耐熱耐水的膜,以及提高食品的彈性和持水能力。
微生物來源的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(MTGase)由于其易得性、反應條件溫和以及不依賴鈣離子調(diào)節(jié)等優(yōu)點,在蛋白質(zhì)的定點修飾中也得到了廣泛應用。通過基因工程手段,可以在蛋白質(zhì)的特定部位引入MTGase特異性識別的標簽,實現(xiàn)蛋白質(zhì)與小分子、蛋白質(zhì)、聚合物、糖類物質(zhì)和脂質(zhì)體之間的定點偶聯(lián),以及短肽的自身環(huán)化,這些修飾產(chǎn)物在藥物化學、化學生物學以及生物材料等領域有廣泛應用。
活性測定:檢測TGase的催化活性,這是評估TGase性能的基本指標。
純度檢測:評估TGase的純度,高純度的TGase在食品加工中更為安全有效。
熱穩(wěn)定性測試:由于TGase在食品加工中經(jīng)常面臨不同的溫度條件,因此其熱穩(wěn)定性是一個重要的檢測項目。
pH穩(wěn)定性測試:檢測TGase在不同pH值條件下的穩(wěn)定性,因為食品加工過程中pH值變化可能影響酶的活性。
底物特異性:研究TGase對不同底物的催化效率,這有助于了解其在特定食品加工過程中的應用潛力。
毒性測試:進行必要的毒性測試,以確保TGase作為食品添加劑的安全性。
微生物檢測:確保TGase產(chǎn)品中不存在有害微生物,符合食品安全標準。
重金屬和有毒元素檢測:檢測TGase中可能存在的重金屬和其他有毒元素,以確保產(chǎn)品安全。
蛋白質(zhì)含量測定:檢測TGase中的蛋白質(zhì)含量,以評估其質(zhì)量。
比活性測定:比活性是單位質(zhì)量TGase的活性,是衡量TGase質(zhì)量的一個重要參數(shù)。
酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA):這是一種常用的檢測方法,通過特異性抗體檢測TGase的存在和活性。
熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET):利用FRET技術可以檢測TGase催化的蛋白質(zhì)交聯(lián)反應。
聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE):通過SDS-PAGE可以觀察TGase催化的蛋白質(zhì)交聯(lián)后分子量的變化。
高效液相色譜法(HPLC):用于檢測TGase催化的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物,從而間接反映TGase的活性。
動態(tài)光散射(DLS):用于檢測TGase催化形成的蛋白質(zhì)聚集體的大小分布。
國家標準GB/T 34795-2017:這是一個具體的檢測標準,規(guī)定了茂原鏈輪絲菌和天竺鼠來源的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶活性檢測方法。
紫外-可見光譜法:通過測定TGase催化反應中產(chǎn)生的特定化合物的吸光度來評估其活性。
質(zhì)譜法:通過分析TGase催化的蛋白質(zhì)交聯(lián)產(chǎn)物的質(zhì)譜圖譜來確定其活性。
使用的儀器還包括酶標儀、恒溫箱、高效液相色譜儀、紫外-可見分光光度計、動態(tài)光散射(DLS)儀器、凝膠成像系統(tǒng)、熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)儀器、質(zhì)譜儀等。
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